紫外線(xiàn)燈在薄層色譜TLC實(shí)驗中如何操作？

信息摘要：

在進(jìn)行薄層色譜TLC實(shí)驗時(shí)，操作紫外線(xiàn)燈時(shí)要佩戴好紫外線(xiàn)防護面罩，因為你TLC試驗用的都是雙波長(cháng)紫外線(xiàn)燈，短波對皮膚很眼睛傷害特大，長(cháng)波對眼睛傷害很大，不做防護臉部皮膚會(huì )起泡和紅腫，眼睛會(huì )造成玻璃體混濁，視力下降。

在進(jìn)行薄層色譜TLC實(shí)驗時(shí)，操作紫外線(xiàn)燈時(shí)要佩戴好LUV-40紫外線(xiàn)防護面罩，因為你TLC試驗用的都是雙波長(cháng)紫外線(xiàn)燈，短波對皮膚很眼睛傷害特大，長(cháng)波對眼睛傷害很大，不做防護臉部皮膚會(huì )起泡和紅腫，眼睛會(huì )造成玻璃體混濁，視力下降。

先將LEAC-280L紫外線(xiàn)燈電源插上，選擇打開(kāi)需要照射的波長(cháng)開(kāi)關(guān)，把跑膠板放在紫外線(xiàn)燈下面照射即可。如果有LCM-26紫外線(xiàn)觀(guān)察箱，在紫外線(xiàn)觀(guān)察箱里面觀(guān)察效果會(huì )更好。

薄層色譜（TLC）實(shí)驗步驟：

1、切割薄板。通常，買(mǎi)來(lái)的硅膠板都是方形的玻璃板，必需用鉆石頭玻璃刀按照模板的形狀進(jìn)行切割。在切割玻璃之前，用尺子和鉛筆在薄板的硅膠面上輕輕地標出基線(xiàn)的位置（注意不要損壞硅膠面）。借助鋒利的玻璃切割刀和一把引導尺，你便可方便地進(jìn)行玻璃切割。當整塊玻璃被切割后，你就可以進(jìn)一步將其分成若干獨立的小塊了。（開(kāi)始的時(shí)候，也許你會(huì )感到有一些難度，但經(jīng)過(guò)一些訓練以后，你便會(huì )熟練地掌握該項技術(shù)。）

2、選取合適的溶劑體系?；衔镌诒“迳弦苿?dòng)距離的多少取決于所選取的溶劑不同。在戊烷和己烷等非極性溶劑中，大多數極性物質(zhì)不會(huì )移動(dòng)，但是非極性化合物會(huì )在薄板上移動(dòng)一定距離。相反，極性溶劑通常會(huì )將非極性的化合物推到溶劑的前段而將極性化合物推離基線(xiàn)。一個(gè)好的溶劑體系應該使混合物中的化合物都離開(kāi)基線(xiàn)，但并不使化合物都到達溶劑前端，Rf值好在0.15~0.85之間。雖然這個(gè)條件不一定都能滿(mǎn)足，但這應該作為薄層色譜分析的目標（在柱色譜中，合適的溶劑應該滿(mǎn)足Rf在0.2~0.3之間）。那么，應該選取哪些溶劑呢？一些標準溶劑和他們的相對極性列于如下：

強極性溶劑：

甲醇>乙醇>異丙醇

中等極性溶劑：

乙腈>乙酸乙酯>氯仿>二氯甲烷>乙MI>甲苯

非極性溶劑：

環(huán)己烷，石油醚，己烷，戊烷

常用混合溶劑：

乙酸乙酯/己烷：常用濃度0~30%。但有時(shí)較難在旋轉蒸發(fā)儀上除去溶劑。

乙MI/戊烷體系：濃度為0~40%的比較常用。在旋轉蒸發(fā)器上非常容易除去。

乙醇/己烷或戊烷：對強極性化合物5~30%比較合適。

二氯甲烷/己烷或戊烷：5~30%，當其他混合溶劑失敗時(shí)可以考慮使用。

3、將1~2mL選定的溶劑體系倒入展開(kāi)池中，在展開(kāi)池中放置一大塊濾紙。

4、將化合物在標記過(guò)的基線(xiàn)處進(jìn)行點(diǎn)樣。我們用的毛細管是買(mǎi)來(lái)的，此外，毛細管也可從加熱過(guò)的Pasteur吸管上拔下。在跟蹤反應進(jìn)行時(shí)，一定要點(diǎn)上起始反應物、反應混合物以及兩者的混合物。

5、展開(kāi)：讓溶劑向上展開(kāi)約90%的薄板長(cháng)度。

6、從展開(kāi)池中取出薄板并且馬上用鉛筆標注出溶劑到達的前沿位置。根據這個(gè)計算Rf的數值。

7、讓薄板上的溶劑揮發(fā)掉。

8、用非破壞性技術(shù)觀(guān)察薄板。好的非破壞性方法就是用紫外燈進(jìn)行觀(guān)察。將薄板放在紫外燈下，用鉛筆標出有紫外活性的點(diǎn)。盡管在5.301中不用這種方法，但我們將采用另一常用的無(wú)損方法——用碘染色法。

9、用破壞性方式觀(guān)測薄板。當化合物沒(méi)有紫外活性的時(shí)候，只能采用這種方法。在各種TLC顯色劑的調配方法中，提供了很多非常有用的染色劑。使用染色劑時(shí)，將干燥的薄板用鑷子夾起并放入染色劑中，確保從基線(xiàn)到溶劑前沿都被浸沒(méi)。用紙巾擦干薄板的背面。將薄板放在加熱板上觀(guān)察斑點(diǎn)的變化。在斑點(diǎn)變得可見(jiàn)而且背景顏色未能遮蓋住斑點(diǎn)之前，將薄板從加熱板上取下。

10、根據初始薄層色譜結果修改溶劑體系的選擇。如果想讓Rf變得更大一些，可使溶劑體系極性更強些；如果想讓Rf變小，就應該使溶劑體系的極性減小些。如果在薄板上點(diǎn)樣變成了條紋狀而不是一個(gè)圓圈狀，那么你的樣品濃度可能太高了。稀釋樣品后再進(jìn)行一次薄板層析，如果還是不能奏效，就應該考慮換一種溶劑體系。

11、做好TLC標記，計算每個(gè)斑點(diǎn)的Rf值，并且在筆記本中畫(huà)出圖樣。